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細胞計數器的原理

更新時(shí)間:2024-06-20  |  點(diǎn)擊率:116

細胞計數器的原理

     細胞培養技術(shù)中,細胞計數是一項基本功,對于標準化培養條件以及需要定量的實(shí)驗來(lái)說(shuō)都關(guān)鍵。這里介紹使用血細胞計數器對細胞進(jìn)行計數的經(jīng)典方法以及中間一些需要注意的細節。
制備細胞懸液:
對于貼壁生長(cháng)的細胞,我們需要使用胰酶消化的方法使細胞從培養皿表面脫落
根據需要加入合適體積的培養基,將細胞進(jìn)行中和及稀釋?zhuān)缘玫骄|(zhì)的細胞懸液。要求盡可能將細胞吹打散開(kāi),不要殘留任何細胞團
準備血細胞計數器:
使用70%乙醇將蓋玻片和血細胞計數器清潔干凈
將將蓋玻片潤濕(使用水或呼一口氣,目的是使蓋玻片與血細胞計數器接觸更緊密,易于粘連),并覆蓋至血細胞計數器上
臺盼蘭染色(可選):
如果需要計算細胞的活力,則需要將細胞懸液和0.4%臺盼蘭等體積混合
室溫孵育3-5分鐘,使臺盼蘭進(jìn)入死細胞,使死細胞著(zhù)藍色
血細胞計數器加樣:
使用吸管將細胞懸液或細胞/臺盼蘭混合液滴加到血細胞計數器計數池的邊緣。此時(shí)液滴將在虹吸的作用下進(jìn)入蓋玻片下方的計數池
以同樣的方式在另一側的計數池中也加入細胞懸液
將計數板放置幾分鐘使細胞擴散,同時(shí)用吸水紙吸除多余的液體
細胞計數:
在100倍顯微鏡下,移動(dòng)計數板將視野對準計數板的中央大方塊,該方塊四周有一圈3條平行線(xiàn)包圍,中間有密集的網(wǎng)格。中央方塊區差不多剛好可以填滿(mǎn)整個(gè)視野
使用手持式計數器記錄計數池四個(gè)角以及中央方塊內的細胞數(1-5號位置,經(jīng)典的current-protocol推薦每個(gè)方塊細胞數應不大于20-50),并重復記錄另一側計數池中的細胞數,總計十個(gè)方塊。計數的方法是只計算上邊和左邊壓線(xiàn)的細胞,而右邊和下邊壓線(xiàn)的細胞不予計算(下圖,總體原則是“計上不計下,計左不計右",判斷標準為是否接觸三條邊線(xiàn)的中間線(xiàn))。如果有多個(gè)細胞沒(méi)有吹散成團存在,此時(shí)只可記為一個(gè)細胞。如果團塊很多,則可能需要重新吹打甚至消化直至絕大多數細胞為單個(gè)細胞

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